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產品說明：

使用說明：

基本描述:

CFDA，SE是一種穩定的、細胞膜滲透性的非熒光染料，由兩個醋酸基團和一個琥珀酰亞胺酯(SE) 官能團組成的一個熒光分子。一旦主動擴散進入細胞，其醋酸基團被胞內酯酶切割，生成熒光素酯CFSE。CFSE具有高度熒光，且能通過其琥珀酰亞胺酯基團共價結合到細胞內的蛋白氨基基團。正是這個共價偶聯反應，CFSE能夠極其長期的保留在細胞內，長達數個月。

另外，歸因于這一穩定連接,一旦染料進入細胞， 不會轉移到鄰近細胞。無活力細胞仍然是非熒光。而活細胞一旦分化，CFSE能夠很均勻的分散到子細胞中，每分裂一次子代細胞約能得到親本細胞1/2的熒光強度，因此，通過流式細胞儀對熒光強度的檢測，能夠依次分選出未分裂細胞，分裂一次的細胞(1/2熒光強度)，分裂兩次的細胞(1/4熒光強度)，分裂三次的細胞(1/8熒光強度) , 以及以此類推其他分裂次數的細胞。CFSE可以檢測分裂多達8次或更多次數的細胞增殖。

使用方法
一.  儲存液制備

將低溫保存的凍干粉產品置于室溫回溫至少20min,之后短暫低速離心，讓所有粉末都掉落至管底。稱取適量粉末用高質量無水DMSO溶解配制10mM儲存液。比如5mg CFDA, SE (Mw: 557.46)用897μl DMSO充分溶解即得到10mM儲存液。根據單次用量分裝，置于≤-20°C避光干燥保存， 避免反復凍融。儲存液最好是一個月內用完，最多不超過三個月。

二.工作液制備

于正式實驗前，用HHBS緩沖液或其他生理緩沖液(pH 7.0)稀釋儲存液到1-10μM工作濃度，渦旋混勻。

[注意事項] :

1 CFDA, SE是胺反應性。CFDA, SE標記步驟不可使用含首胺的緩沖液，比如，HHBS或PBS是推薦的CFDA, SE稀釋緩沖液。

2 CFDA, SE的染色濃度需要根據使用的細胞類型和實驗目的來進行優化調整。比如，如果用于細胞增殖的熒光逐漸稀釋分析,相對高濃度的CFDA, SE染色工作液比較理想；如果僅是用來標記細胞用作另外一種熒光標志探針的復染劑，相對低濃度的CFDA, SE染色工作液比較理想，能夠良好的防止不同濾片設置間的熒光溢出。

三. 染色步驟

3.1室溫300 xg離心細胞5min,吸掉上清。

3.2用預熱的無菌HHBS. PBS或其他生理緩沖液清洗細胞以去除任何殘留的血清蛋白。之后同上離心細胞，吸掉上清。

3.3用上述配制好的CFDA, SE染色工作液重新懸浮細胞，制備成1-3 x 107cells/mL的單細胞懸液。

3.4室溫或37℃避光孵育15~ 30min。中間可偶爾的輕輕顛倒混勻使得細胞均勻接觸到染料。

3.5加入5倍原始染色體積的細胞培養液(含10% FBS)來淬滅染色過程，輕輕顛倒幾次混勻。

3.6室溫300 xg離心細胞5min,吸掉上清。再用10ml完全細胞培養液清洗細胞一次。

3.7再用10ml完全細胞培養液重新懸浮細胞，37℃解育5min, 以促進CFDA, SE在細胞內的充分反應和未反應的CFDA, SE重新回到完全細胞培養液中。離心去上清，完成最后一次清洗。

3.8之后用完全細胞液重懸細胞，此時可用熒光顯微鏡或流式細胞儀來觀察標記效果。或開始用藥物刺激處理或繼續常規培養。經適當時間后用流式細胞儀檢測細胞增殖，或用于特定目的的細胞示蹤。標記細胞也可用于活體動物的移植，并用熒光進行示蹤。

注意事項：

為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

本產品僅供科研使用，不可用于臨床診斷應用或其他用途。