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基本描述:

5-氟乳清酸(5-Fluoroorotic Acid, 5-FOA)用于酵母負選擇是一種常用的分子遺傳篩選方法。酵母菌質粒清除、質粒穿梭、 等位置換和雙雜交篩選都會用到5-FOA。5-FOA自身對酵母細胞無毒，但功能型URA3基因能編碼表達乳清酸核苷-5'-單磷酸脫羧酶(OMP脫羧酶)，將其轉化為有毒形式(如5-氟尿嘧啶)，從而使得酵母細胞無法生長。

因此，在添加尿嘧啶的5-FOA培養基中，攜帶URA3突變基因的酵母菌能正常生長。5-FOA主要用于融酒酵母Saccharomyces cerevisiae (URA3) 的鑒定和篩選，雖然曾用于其他菌株，包括要酒裂殖酵母Schizosaccharomyces pombe (URA4 and URA5)。白色念珠菌Candidaalbicans (URA3)和大腸桿菌E. coli (pyrF) 。酵母雙雜交系統中5-FOA的使用允許構建激活結構域雜交文庫來鑒定蛋白-蛋白相互作用。

使用方法
一.5-FOA培養基配置方法(以粉末形式)
       1.1配制400ml標準的酵母合成培養基，并加入1g 5-FOA 粉末，充分溶解混勻，0.22μm濾膜過滹除菌。[或者可當高 壓滅菌的標準培養基冷卻到55°C后再加入1g 5-FOA粉末，然后過濾除菌。]

       1.2高壓滅菌瓊脂粉/水混合液(濃度為20g/600ml)，使其冷卻到55℃

       1.3將溫熱的5-FOA培養液倒入瓊脂粉/水溶液內，攪勻后，倒平板。

二、5-FOA培養基配置方法(以儲存液形式)
      2.1取100mg 5-FOA凍干粉，用1ml無水DMSO充分溶解，配制成100mg/ml (100x) 的儲存液。短期頻繁使用，置于4℃避光保存;長期保存，根據單次用量分裝凍存，-20℃保存6個月有效。
      2.2根據實驗室認可的方法,配制標準的酵母合成培養基(含瓊脂粉)，高壓滅菌。放入轉子一起滅菌以便后續攪勻組分用。

2.3冷卻到55℃后加入任何熱敏感組分(氨基酸，糖類或者其他成分) .

2.4每升培養基加10ml 100x 5-FOA儲存液，混勻后，倒平板。

注意事項：

1、5-FOA微溶于水，粉末溶解過程中可加熱(如55-65℃) 助溶30min~1h直至完全溶解。5-FOA極易溶于DMSO,但高濃度DMSO對細胞有毒，需注意控制DMSO的終濃度。
     2、5-FOA培養基不用調節pH。
     3、5- FOA培養基平板置于4℃避光保存，可存放3個月，建議用封口膜封口四周

4、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

本產品僅供科研使用，不可用于臨床診斷應用或其他用途。